摘要   目的：探讨两种方法对导管医疗器具无菌检查的适用性，给同行提供参考。方法：分别采用《中国药典》2010 年版二部规定的洗脱 - 收集 - 薄膜过滤法和改进后的直接接种法，对市场抽检及企业委托送检的导管医疗器具 59 批进行无菌检查。结果：两种方法检测样品结果均符合《中国药典》的规定。结论：两种方法均可选用，但改进后的直接接种法操作更简单、更方便，能提高工作效率，节约实验成本。

一次性无菌导管医疗器具在临床上应用非常广泛，它的卫生质量至关重要。按标准要求必须进行彻底灭菌，否则易造成患者发生感染，甚至危及生命。因此，无菌检查是保证一次性无菌导管医疗器具安全性的一个重要环节，是必检项目 [1]。依据《中国药典》2010 年版二部附录 X IH 无菌检查法，对具有导管的医疗器具（输血、输液袋等）的无菌检查做了规定：取供试品规定量（上市样品 10 个最小包装），每个最小包装用 50~100 mL 冲洗液分别冲洗内壁，收集冲洗液于无菌容器中，然后照水溶液供试品项下方法操作。同时应采用直接接种法进行包装中所配带的针头的无菌检查 [2]。笔者在实践检验中发现此方法操作比较繁琐，关键是收集冲洗液这一步，操作用时较长，对操作者的要求非常严格，一旦造成污染，会给实验带来不准确的结果。因此，本文分别应用《中国药典》2010 年版二部规定的洗脱 - 收集 - 薄膜过滤法和改进后的直接接种法，对一次性无菌导管医疗器具进行无菌检查试验及操作比较，为同行提供参考。

1      实验材料与方法

1.1     材料来源 

样品来自我所 2014 年抽检及企业委托送检的一次性使用输液（血）器，共计 59 批。

1.2    培养基和主要仪器设备 

无菌培养袋（带压条）（青岛高科园海博生物技术有限公司，批号：20140306），硫乙醇酸盐液体培养基（北京三药科技开发公司，批号： 130206），改良马丁培养基（北京三药科技开发公司，批号：130723），培养基的无菌性和灵敏度均符合《中国药典》规定。全自动智能无菌检测仪（美国Millipore公司），集菌培养器（杭州泰林生物技术设备有限公司，型号：PY330，批号： 20131020），电热恒温培养箱（上海跃进医疗器械厂，HH·B11·600），生化培养箱（广东省医疗器械厂，LRH-250-Ⅱ）。

1.3    阳性对照菌 

金黄色葡萄球菌[CMCC(B)26003]，购自中国食品药品检定研究院，实验用菌株为第 4 代菌株。

1.4    实验方法

《中国药典》2010 年版规定的方法：取供试品 15 个（在进入超净工作台前，样品外包装已做好消毒），每个最小包装用 50~100 mL 冲洗液分别冲洗内壁，收集冲洗液于无菌容器中，然后冲洗液直接过滤 3联集菌培养器中，2 个培养器中各加入 100 mL 硫乙醇酸盐流体培养基，其中一个加入小于 100 cfu 金黄色葡萄球菌做阳性对照，第 3 个培养器中加入 100 mL 改良马丁培养基。另取同批冲洗液直接过滤，分别加入 100 mL 硫乙醇酸盐流体培养基及 100 mL 改良马丁培养基，作 为阴性对照。细菌置 30~35℃培养 14 天，真菌置 20~25 ℃培养 14 天，培养期间逐日观察并记录是否有菌生长。同时采用直接接种法进行包装中所配带的针头的无菌检查。

改进后的直接接种法：取供试品10 个（在进入超净工作台前，样品外包装已做好消毒），无菌操作将每个包装剪开，用无菌剪刀把导管分成若干小段（每小段小于 15 cm），然后用无菌镊子将其分别置于含 300 mL 硫乙醇酸盐流体培养基的无菌培养袋和含 300 mL 改良马丁培养基的无菌培养袋中，样品处于培养基底部，导管内外完全能被培养基浸泡到，见图 1。另取 1 个供试品同法操作，接种置含 100 mL 硫乙醇酸盐流体培养基的无菌培养袋中，加入小于 100 cfu 金黄色葡萄球菌做阳性对照。取含 100 mL 的硫乙醇酸盐流体培养基和改良马丁培养基的无菌培养袋各 1 袋，作为阴性对照。细菌置 30~35 ℃培养 14 天，真菌置20~  培养 14 天，培养期间逐日观察并记录是否有菌生长。

1.5    评价标准 

阳性对照管应生长良好，阴性对照管不得有菌生长，否则试验无效。若供试品管均澄清，或虽显浑浊但经确证无菌生长，判供试品符合规定；若供试品管显浑浊并确证有菌生长，判供试品不符合规定，除非能充分证明试验结果无效，即生长的微生物非供试品所含。

2      结果

本次共检测样品 59 批，采用两种方法检测，结果均符合规定。见表 1。

59 批样品使用两种方法做的阳性对照试验，对照菌均生长良好，说明样品无抑菌作用或抑菌作用可以忽略不计。一次性使用输液（血）器是由不含抑菌成分的原料制作成型，密封包装成整套产品。产品经环氧乙烷灭菌后，再通过过滤后的无菌空气，经真空空气循环过程，使残留环氧乙烷安全去除^[3]。因此，一次性使用输液（血）器中无抑菌成分。

两种方法对 59 批样品进行无菌检查，检测结果均符合《中国药典》评价标准的规定。比较两种方法的操作，在应用药典方法收集洗脱液过程中，样品和洗脱液暴露时间过长，易受污染，因此应用药典方法对操作者的操作要求相对严格。有文献报道一次性医疗器具用浸泡法检出阳性率高于洗脱  对导管医疗器具来说，直接浸泡法不仅能检测样品的内壁，还包括外壁，而收集冲洗液只能检测内壁。并且导管医疗器具有关节腔，是洗脱盲点，是洗脱液洗脱不到的地方，易造成漏检。再者，在染菌量较小的情况下，菌的收集会受到洗脱程度和洗脱液量的影响^[6]，因此，采用收集洗脱液进行医疗器具的无菌检查，易造成漏检。至今也有部分学者在进行输液（血）器的无菌检查时采用浸泡法，即用无菌剪刀剪取输液（血）器的针头、部分滴管等直接投入 40 mL 的培养管内 ^[5，7]。40mL 培养基只能浸泡很少量的样品，李勇等 ^[8] 针对取样数量对无菌检查结果的影响进行了研究，结果表明，取样数量越小，染菌样检出的概率越小，无菌检查误判的可能性越大。因此，能采用整套样品进行无菌检查可防止漏检。改进的直接接种法不仅合理，而且比药典规定的方法操作更简单、更方便，能提高工作效率，节约试验成本，建议推广应用。改进的方法不仅对导管类医疗器具适用，对一次性使用辅助生育套包、一次性手术套包、一次性内腔冲洗器等一次性无菌医疗器具同样适用。

文章来自：黄结，王涛-广西壮族自治区食品药品检验所